沉默结缔组织生长因子基因对肝星状细胞生长和细胞周期的影响

目的·探讨沉默结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,Ctgf)基因对大鼠肝星状细胞HSCT6的生长、细胞周期及其转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、Smad3和Smad7表达的影响.方法·采用RNA干扰技术构建Ctgf基因的pCDH/Ctgf-shRNA重组慢病毒载体.该重组载体经病毒包装后获得高感染力的pCDH/Ctgf-shRNA病毒颗粒用于感染HSCT6细胞.荧光显微镜观测被感染HSCT6细胞的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达情况;CCK-8试剂盒检测被感染HSCT6细胞的生长变化;流式细胞术检测被感染HSCT6细胞的周期变化.Real-time PCR和Western blotting分别检测pCDH/Ctgf-shRNA病毒对HSCT6细胞的Ctgf基因的沉默效应及对TGF-β1、Smad3和Smad7表达的影响.结果·成功构建Ctgf基因的重组病毒载体pCDH/Ctgf-shRNA.荧光显微镜观测表明,被感染重组病毒的HSCT6细胞显著表达GFP.CCK-8检测结果证实,与对照细胞相比,沉默Ctgf基因的HSCT6细胞生长明显受抑,72 h开始两者差异具有统计学意义(P<0.05).流式细胞术检测表明,沉默Ctgf基因的HSCT6细胞可被阻滞于S期.Real-time PCR和Western blotting检测表明,pCDH/Ctgf-shRNA病毒能有效沉默HSCT6细胞的Ctgf基因,下调TGF-β1、Smad3基因及其蛋白的表达,上调Smad7基因及其蛋白的表达;与对照比较,差异皆有统计学意义(均P<0.05).结论·沉默Ctgf基因能抑制HSCT6细胞生长,使其TGF-β1、Smad3的表达下调,同时上调其Smad7的表达;这种生长受抑可能与其TGF-β1/Smads(Smad3/Smad7)信号通路受阻紧密相关.