大肠埃希菌CLM37菌株Lpp基因敲除及胞外表达N-糖基化重组蛋白研究
Journal of Shanghai Jiaotong University(Medical Science)（2018）
Abstract
目的· 构建外膜脂蛋白Lpp(Braun's lipoprotein)基因缺失的大肠埃希菌菌株,在该菌株中进行大肠埃希菌胞外生产N-糖基化重组蛋白研究.方法· 利用Red同源重组系统,敲除大肠埃希菌CLM37基因组上的外膜脂蛋白Lpp基因;通过绘制生长曲线,研究Lpp基因缺失后对大肠埃希菌生长状态的影响.将受体蛋白表达载体pIG6-rFn3-Gly和空肠弯曲杆菌来源的N-糖基化基因簇载体pACYCpgl共转化大肠埃希菌CLM37?Lpp,研究大肠埃希菌胞外生产N-糖基化重组蛋白情况.结果· 获得了Lpp基因缺失的大肠埃希菌菌株CLM37?Lpp,并在该菌株中成功实现了胞外生产N-糖基化重组蛋白rFn3-Gly;相比于菌株CLM37,大肠埃希菌CLM37?Lpp胞外生产重组蛋白rFn3-Gly的总量约提升了4倍,糖基化效率约提高了6倍.结论· 成功构建大肠埃希菌菌株CLM37?Lpp并实现了胞外生产N-糖基化重组蛋白rFn3-Gly,提高了糖蛋白产量及糖基化效率.
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