人胰岛素瘤相关蛋白-2基因的克隆及原核表达研究
ACTA UNIVERSITATIS MEDICINALIS SECONDAE SHANGHAI（2003）
摘要
目的克隆1型糖尿病自身抗原人胰岛素瘤相关蛋白-2(IA-2)的编码基因,并从大肠杆菌中表达具有免疫原性的人IA-2重组蛋白.方法抽提胎脑总RNA,通过RT-PCR获得编码IA-2胞内结构域的cDNA,与Pinpoint Xa-1T质粒相连接,构建表达型重组质粒,经转化、筛选并鉴定后,从大肠杆菌诱导表达生物素酰化融合蛋白,进而用亲和层析纯化之,以dot-blot鉴定其免疫原性.结果重组质粒转化的大肠杆菌经IPTG诱导表达及亲和层析后得到了纯度较高、分子量约为59kd的融合蛋白,表达产物用dot-blot证明具有免疫原性.结论原核表达的生物素酰化人IA-2胞内段融合蛋白具有正确的免疫学构象.
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