大剂量咖啡因对脂多糖诱导的新生大鼠神经细胞活力及PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响

目的:探讨大剂量咖啡因对脂多糖(LPS)诱导的新生大鼠神经细胞活力和PI3K/AKT信号通路蛋白表达的影响.方法:分离及培养原代大鼠(出生24 h以内)大脑皮层神经细胞.将神经细胞分为空白对照组、LPS组、咖啡因组和咖啡因+LPS组.空白对照组细胞仅用培养液培养24 h;LPS组和咖啡因组细胞分别用10 mg/L的LPS及5 mmol/L的咖啡因处理24 h;咖啡因+LPS组细胞用5 mmol/L咖啡因和10 mg/L的LPS处理24 h;采用MTT法检测细胞活力,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western blot法检测细胞中PCNA、Cleaved Caspase-3、PI3K和磷酸化AKT(p-AKT)蛋白的表达.另取大鼠神经细胞分为两组:咖啡因+LPS组细胞用咖啡因和LPS诱导24 h;咖啡因+LPS+LY294002组细胞用咖啡因、LPS和PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002处理24 h;然后检测两组细胞活力、凋亡率及PCNA、Cleaved Caspase-3、PI3K、p-AKT蛋白的表达.结果:LPS和咖啡因单独作用均可抑制神经细胞存活,诱导凋亡,下调PCNA、PI3K和p-AKT表达,上调Cleaved Caspase-3表达(P<0.05);两者联用具有协同增效的作用(P<0.05).与咖啡因+LPS组比较,咖啡因+LPS+LY294002组细胞活力降低,凋亡率升高,PCNA、PI3K和p-AKT蛋白表达降低,Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05).结论:大剂量咖啡因可通过抑制PI3K/AKT信号通路,增强LPS诱导的新生大鼠神经细胞活力抑制和凋亡促进作用.