食管鳞癌紫杉醇耐药细胞株的建立及耐药机制探讨

目的:建立食管鳞癌紫杉醇(PTX)耐药细胞株EC1/PTX,并对其耐药机制进行初步探讨.方法:采用大剂量间歇冲击结合时间递增的方法构建食管鳞癌耐药细胞株EC1/PTX.倒置显微镜下观察EC1/PTX形态变化;细胞计数法绘制EC1和EC1/PTX的生长曲线并计算倍增时间;CCK-8法检测PTX、多柔比星、五氟尿嘧啶、顺铂对细胞的IC50及其耐药指数;Transwell实验检测细胞迁移、侵袭能力;流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;Western blot法检测细胞中P-糖蛋白(P-gp),凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果:历时8个月成功构建了EC1/PTX.EC1/PTX细胞多呈聚团生长状态;对PTX的耐药指数为12.82,并表现出多药耐药.与EC1相比,EC1/PTX生长倍增时间延长;迁移和侵袭能力增强;细胞周期分布改变,G0/G1、S期细胞增多,G2/M期细胞减少;细胞凋亡率下降;平板克隆形成能力降低;P-gp、Bcl-2蛋白表达升高,Bax表达降低(P<0.05).结论:成功建立了食管鳞癌耐药细胞株EC1/PTX,其耐药机制可能与P-gp及Bcl-2家族蛋白的表达变化有关.