酵素-Ⅱ分离人神经干细胞球

目的:寻找一种有效分离神经干细胞球并获得大量单个神经干细胞的方法.方法:取20周胎龄人胚胎脑组织分离单细胞,应用DMEM/F12培养基培养形成神经干细胞球,取神经干细胞球,分别以2.50 g/L、1.25 g/L胰蛋白酶及0.6 u/ml、1.2 u/ml、1.8 u/ml、2.4 u/ml酵素-Ⅱ(DispaseⅡ)消化,观察消化过程及细胞形态,对消化后的单个细胞进行培养,观察细胞生长情况,并进行免疫细胞化学染色鉴定.结果:各浓度DispaseⅡ均能较完全地消化神经干细胞球,其中1.2 u/ml、1.8 u/ml DispaseⅡ消化后的细胞生长状况最佳.胰蛋白酶消化后细胞有较大的损伤,成活细胞少.消化后的细胞Nestin抗体染色结果(+),证实为神经干细胞.结论:一定浓度的DispaseⅡ消化神经干细胞球后,可获得大量成活单个神经干细胞.