miR-99a对高胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响及机制研究

目的 观察miR-99a对高浓度胰岛素诱导小鼠主动脉血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)增殖的影响及可能机制.方法 原代培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞,用超生理浓度剂量胰岛素(100 nmol/L)作用于血管平滑肌细胞,用荧光实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测miR-99a表达变化情况.Brdu法检测转染miR-99a对高胰岛素促细胞增殖的影响.qRT-PCR及Western blot检测转染miR-99a组及阴性对照组哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammaliantarget of rapamycin,mTOR)mRNA及蛋白变化情况,并检测转染miR-99a对高胰岛素促进mTOR表达及对其下游通路激活的影响.Western blot检测转染miR-99a组及阴性对照组细胞周期素D1(CyclinD1)的变化.结果 高浓度胰岛素显著降低miR-99a的表达.转染miR-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的VSMC增殖作用.miR-99a负向调节mTOR mRNA及蛋白,转染miR-99amimic可显著削弱高胰岛素促进的mTOR/P70S6K1通路激活作用,而转染miR-99a inhibitor可增加高胰岛素促进mTOR/p70s6k1通路激活作用.转染miR-99a mimic后可减少基础的及胰岛素促进的CyclinD1表达.结论 miR-99a可通过负向调节mTOR抑制高胰岛素诱导的VSMC细胞增殖作用.