人促甲状腺激素受体A亚基在大肠杆菌中的表达及免疫活性

目的 构建人促甲状腺激素受体(TSHR)A亚基的原核表达载体pET 102/D-TOPO/TSHRA,在大肠杆菌中表达并分析其免疫活性.方法 采用逆转录—聚合酶链式反应扩增TSHRA基因编码序列,定向连接到载体pET102/D-TOPO中,经聚合酶链式反应、酶切、测序鉴定后转化大肠杆菌BL21 StarTM (DE3);异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导表达TSHR A亚基融合蛋白,超声裂解细菌,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、Western blotting鉴定,在变性、复性、镍柱纯化后,目的蛋白与Graves患者血清结合鉴定其免疫活性.结果 成功构建pET102/D-TOPO/TSHRA亚基表达载体,优化融合蛋白表达条件,SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定重组质粒可表达47 kD大小的特异性蛋白,Western blotting鉴定其被His抗体、鼠源性抗人促甲状腺激素受体多克隆抗体识别,复性后融合蛋白与Graves患者混合血清呈强阳性结合,正常人血清未有任何形式的结合.结论 成功构建人促甲状腺激素受体A亚基原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了其亚基融合蛋白,该蛋白与Graves患者血清呈强阳性特异性结合.