银染mRNA差异显示方法的建立
JOURNAL OF FUJIAN MEDICAL UNIVERSITY（2002）
摘要
目的建立银染mRNA差异显示方法,为差异表达基因片断的分离克隆奠定基础. 方法采用随机引物和锚定引物各1条,建立差异显示反转录聚合酶链式反应(DDRT-PCR)和银染方法,对DDRT-PCR过程中各实验影响因素进行优化,割取差异条带进行二次扩增. 结果当总RNA用量为0.2 μg,引物浓度为0.6～1.0 μmol/L,dNTP浓度为200 μmol/L,MgCl2浓度为1.6～2.0 mmol/L时,同时起始5个循环的退火温度为50 ℃,扩增效率最佳,特异性好,背景干净. 结论 DDRT-PCR方法简便、快捷、灵敏、高效,可用于分离差异表达基因.
更多关键词
mrna,silver staining,display,rt-pcr
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