Sirtuin在低氧诱导人脐带间充质干细胞增殖中的作用

目的 探讨低氧对人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)中Sirtuin (SIRT)蛋白表达影响及与细胞增殖的关系.方法 组织块贴壁法分离和培养hUC-MSCs;流式细胞仪鉴定细胞表面标志物;CCK-8法测定低氧与常氧下不同时间点hUC-MSCs的增殖能力;流式细胞仪检测低氧与常氧下细胞周期的变化;免疫荧光与Westem blotting测定低氧与常氧下细胞SIRT蛋白定位与表达.结果 成功分离hUC-MSCs;细胞CD90、CD105、CD29、CD44高表达,CD14、CD19、CD34、CD45、HLA-DR无表达;CCK-8测定低氧培养24、48、72 h细胞的增殖能力均高于常氧培养(P均＜0.05);在低氧下培养24、48 h后S期细胞比率高于常氧培养(P均＜0.05);免疫荧光检测SIRT1、6位于细胞核内,SIRT2定位于胞浆,SIRT3、4、5定位于线粒体.Western blotting测定SIRT1在低氧培养24、48 h蛋白表达量均高于常氧条件(P均＜0.05),常氧培养72 h的SIRT1表达量高于24 h及48 h(P均＜0.05);SIRT2表达量在低氧培养24 h高于常氧培养(P＜0.05),48 h后低于常氧培养,72 h后高于常氧培养(P＜0.05);低氧培养24、48、72 h后SIRT5的表达量均高于常氧处理(P均＜0.05),常氧与低氧培养细胞48 h和72 h后均高于24 h时SIRT5的表达(P均＜0.05).结论 低氧处理24、48、72 h均可以促进hUC-MSCs的增殖.低氧诱导SIRT1、2与5表达改变提示SIRT1、2、5可能参与了低氧对hUC-MSCs增殖的调控.