与甲型副伤寒杆菌噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23相互作用的宿主蛋白的筛选

目的：筛选与甲型副伤寒杆菌（副甲）CMCC50973噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23相互作用的宿主蛋白。方法Sau3AⅠ酶切副甲基因组，回收250～1500 bp 的条带与 pAT 质粒连接，构建 pAT-副甲基因文库；扩增噬菌体早期基因 gp23，与 pBT 构建 pBT-gp23作为诱饵质粒；将 pAT-副甲基因文库和 pBT-gp23共转 KS 宿主菌，利用细菌双杂交技术筛选蓝色单菌。检测筛选出阳性单菌的 LacZ 活性，并提质粒测序，分析其编码蛋白。结果成功构建副甲基因文库，其库容量满足实验的要求，基因文库阳性率接近100％；筛选出的插入基因为编码嘌呤透性酶。结论宿主蛋白（嘌呤透性酶）可能与副甲噬菌体 LSPA1早期蛋白 GP23有相互作用。