胱抑素C对大鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨胱抑素C(CysC)高表达对大鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖能力的影响.方法 取出生1～3 d的Sperague-Dawley(SD)清洁级大鼠10只,体质量10～15 g,差速贴壁法培养乳鼠心肌成纤维细胞;采用Gateway技术构建重组CysC腺病毒高效表达载体(Ad-CysC)并体外转染大鼠CFs;将对数生长期的大鼠CFs随机分成正常细胞组(PBS组),携有绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒组(Ad-GFP组)及CysC腺病毒高表达组(Ad-CysC组).采用蛋白免疫印迹技术(WB)检测CysC蛋白在CFs中的表达情况,通过5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)掺入法检测CysC高表达对CFs增殖能力的影响.结果 经DNA测序及WB结果分析,CysC腺病毒高效表达载体构建成功,转染CFs 24 h后(MOI=200),Ad-CysC的转染效率高达90%以上;用重组CysC腺病毒转染CFs后,CysC蛋白在24 h即有明显的表达上调(P<0.05);与PBS组及Ad-GFP组相比,转染Ad-CysC的CFs在72 h的Brdu摄取率显著提高(P<0.05).结论 大鼠CysC腺病毒高效表达能够促进CFs增殖,可能加速心肌纤维化进程.