人HMGB1真核表达载体的构建及其在单核细胞的表达

目的 构建人高迁移率族蛋白1(HMGBI)表达载体,并探讨其免疫调节作用.方法 从HMGBl克隆载体酶切分离HMGB1基因片段,插入增强型绿色荧光蛋白载体pCITE-EGFP,菌落PCR和酶谱分析鉴定重组载体.重组表达质粒转染人单核细胞系(U937),梯度G418筛选,荧光和Western blot检测HMGB1的表达.结果 茵落PCR和酶谱分析显示目的 基因被正确插入真核表达载体,获得重组质粒pCITE-EGFP-HMGB1,转染U937细胞随培养基中G418浓度的升高而增强,转染细胞中目的 蛋白HMGB1表达量明显升高.结论 成功构建重组栽体 PCITE-EGFP-HMGB1,并获得稳定表达人HMGB1的单核细胞系,为研究HMGB1对单核巨噬细胞的作用及其机制奠定基础.