C端带His标签重组ScFv真核表达载体的构建及鉴定

目的:构建表达抗p185且含His标签的ScFv的真核表达载体.方法:通过PCR自pcDNA-H520C9ScFv-hIL-2质粒中获得H520C9ScFv片段,将此片段插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中;设计引物在ScFv片段C端增加His标签和凝血酶识别序列,再与质粒pcDNA3.1(+)连接,将所得的融合基因进行限制性内切酶EcoR I、Hind Ⅲ双酶切及琼脂糖凝胶电泳鉴定,并测定目的序列.结果:成功将H520C9ScFv片段、His标签和凝血酶识别序列插入真核表达质粒pcDNA3.1(+)中.结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-His-ScFv,为下一步在真核细胞中表达和纯化抗p185单抗奠定基础.