液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)检测血浆肾素活性(PRA)的方法学建立和临床应用评估

目的 建立高血压患者血浆肾素活性(plasma renin activity,PRA)液相色谱-串联质谱(liquid chromatograph y-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)的检测方法,用于早期筛查高血压患者中的原发性醛固酮增多症(primary aldosteronism,PA).方法 arginine13C 15N作为内标,采用Phenomenex Kinetex C18柱(2.6 μm,100 mm×3.0 mm)进行分离,柱温55℃.流动相为0.2％甲醇水溶液和0.2％甲酸甲醇溶液,流速为0.5 mL/min,梯度洗脱.考察该方法的特异性、基质效应、携带污染、重复性、定量下限(lower limit of measuring interval,LLMI)、线性、不精密度、回收率、稀释一致性和血浆标本稳定性.采用LC-MS/MS方法测定296名表面健康人群(男性153名,女性143名,平均年龄48岁)及360名高血压患者(平均年龄52岁,确诊为PA 27例)的血浆样本PRA,并与放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)进行比较.结果 该方法 通过了特异性、基质效应、携带污染、重复性的性能评价.PRA的检测线性范围为0.084 4～30.000 0 ng/mL;PRA的LLMI为0.084 4ng.mL-1·h-1;日间和批内的不精密度变异系数(coefficient of variation,CV)均＜15％;准确度偏差均＜15％,回收率为92.28％～102.62％;建立的生物参考区间为0.25～5.12 ng·mL-1·h-1(立位);与RIA比较,结果相关性较好(r2=0.81,P＜0.05),但存在-18.5％的偏倚;LC-MS/MS所得PRA的醛固酮/肾素活性比值(aldosterone to renin ratio,ARR)对PA的诊断特异性与灵敏度分别为96.3％与91.0％,诊断性能更佳(AUC:0.983vs.0.894).结论我们建立了准确检测PRA的LC-MS/MS方法,适合于临床早期快速筛查PA.