敲除PaLoc毒力岛的无毒性艰难梭菌菌株的构建

Fengqin RAO,Yumei CHENG,Changxue WU,Yi WANG,Guzhen CUI,Xiaolan QI,Wei HONG

Journal of Guizhou Medical University（2019）

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摘要

目的:使用CRISPR-Cfp1系统敲除艰难梭菌毒性(PaLoc)毒力基因岛,构建无毒性艰难梭菌菌株.方法:使用分子克隆方法,构建针对PaLoc毒力岛的基因打靶质粒pWH53;将pWH53质粒转化艰难梭菌630菌株后,诱导Cpf1蛋白表达,PCR筛选发生双交换的PaLoc敲除突变株,测序验证设计位点是否发生等位双交换.结果:PCR结果显示,获得的16株转化子中有8株为敲除PaLoc突变株,阳性率为50％;测序结果显示,获得的8株敲除PaLoc突变株均在设计位点发生了等位双交换.结论:成功构建艰难梭菌毒性毒力岛敲除PaLoc突变株.

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