两步磁珠法提取血浆游离DNA的评价及临床应用

目的 对两步磁珠法提取血浆游离DNA的方法进行评价, 初步探讨血浆游离DNA定量对于肺癌患者实验诊断的意义.方法 在健康志愿者血浆中掺入DNA标准品127 bp, 208 bp和Quick-load@100 bp DNA ladder (由100-1 500 bp DNA片段组成), 采用两步磁珠法和分离柱提取法提取血浆中掺入的DNA标准品;用Qubit测定DNA浓度, 安捷伦2100生物芯片分析仪和琼脂糖凝胶电泳检测分析DNA片段大小分布.用两步磁珠法和分离柱提取法分别提取15例肺癌患者的血浆cfDNA, 利用安捷伦2100生物芯片分析仪和琼脂糖凝胶电泳比较两种方法提取的cf-DNA片段大小分布, 分析cf-DNA浓度与肺癌分期的相关性.结果 两步磁珠法第二步分离的DNA浓度与掺入标准品DNA (127 bp, 208 bp) 片段浓度呈正相关 (r2=0. 985 7, P ＜0. 001);两步磁珠法提取的Quick-load@100 bp DNA ladder第一步分离的DNA片段≥300 bp, 第二步分离的DNA片段≤300 bp, 分离柱提取法重提取的Quick-load@DNA ladder≤1 500 bp.两步磁珠法第二步分离的肺癌患者血浆cf-DNA浓度与肺癌分期呈正相关 (r2=0. 866 4, P=0. 004 9) .分离柱提取法提取的cf-DNA浓度与肺癌分期无显著相关性 (r2=0. 500 9, P=0. 214 5) .结论 两步磁珠法可分别提取不同大小片段的DNA标准品, 同时有效提取肺癌患者血浆中小片段游离DNA, 且其浓度与肺癌分期呈正相关.