miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移

目的 探讨miR-10a-5p是否通过靶向维甲酸受体相关孤儿受体A(RAR-related orphan receptor A,RORA)对胃癌细胞侵袭、迁移产生影响及其作用机制.方法 qRT-PCR检测人正常胃黏膜细胞GES-1与三株胃癌细胞株AGS、SGC-7901、BGC-823中miR-10a-5p的表达水平.以miR-10a-5p高表达的胃癌细胞株SGC-7901作为后续实验研究胃癌细胞株,分为con-trol组(只转染Lipofectamine?2000)、NC组(转染Lipofectamine?2000和NC序列,即转染无关序列)和miR-10a-5p inhibitor组(转染Lipofectamine?2000和miR-10a-5p inhibitor),qRT-PCR检测转染后各组细胞株中miR-10a-5p的表达水平.生物信息学网站Target Scan预测miR-10a-5p与RORA的靶向结合位点.qRT-PCR、Western blot实验分析miR-10a-5p与RORA的靶向调控关系.集落克隆和Transwell实验分别检测下调miR-10a-5p对SGC-7901细胞增殖和侵袭迁移能力的影响.为探究RORA基因对胃癌细胞侵袭、迁移能力的影响,实验分为control组(只转染Lipofectamine?2000)、RORA NC转染组(转染Lipo-fectamine?2000及NC序列)、RORA过表达组(转染Lipofectamine?2000及RORA过表达序列),Transwell实验检测上调RO-RA对SGC-7901细胞侵袭迁移能力的影响.Western blot法检测侵袭、迁移相关蛋白E-cadherin、N-cadherin、Snail的相对表达水平.结果 miR-10a-5p在胃癌细胞株中相对于正常胃黏膜细胞中高表达(P<0.05).生物信息学软件Target Scan预测结果显示,RORA 3'UTR上存在潜在与miR-10a-5p靶向结合的位点(P<0.05),miR-10a-5p能够负向调控RORA基因表达.下调miR-10a-5p后SGC-7901细胞的增殖、侵袭和迁移显著被抑制(P<0.05).过表达RORA能抑制SGC-7901细胞侵袭、迁移能力(P<0.05).过表达RORA后N-cadherin、Snail蛋白表达降低,E-cadherin表达增加(P<0.05).结论 miR-10a-5p通过靶向RORA促进胃癌细胞侵袭、迁移,侵袭、迁移机制可能与上皮间质转化有关.