沉默BCRP表达抑制乳腺癌细胞对阿霉素耐药的机制研究
Journal of Shanxi Medical University(2019)
摘要
目的 用RNAi技术干扰乳腺癌细胞BCRP基因,研究其提高乳腺癌MCF-7/ADR细胞对阿霉素的药物敏感性及分子机制.方法 乳腺癌MCF-7/ADR细胞分为空白对照、阴性对照(无效siRNA)、BCRP siRNA、阿霉素、BCRP siRNA+阿霉素组.分别用实时荧光定量PCR和Western blot检测乳腺癌细胞BCRP mRNA及蛋白水平,MTT法检测细胞增殖,FCM检测细胞凋亡,实时荧光定量PCR和Western blot方法检测PKC、p53、Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平.结果 转染BCRP siRNA后,实时荧光定量PCR和Western blot结果显示MCF-7/ADR细胞中BCRP mRNA和蛋白表达量均显著降低(P<0.01).MTT检测结果显示,与阴性对照组比较,BCRP siRNA组、阿霉素组、BCRP siRNA+阿霉素组MCF-7/ADR细胞增殖能力受到显著抑制;与阿霉素组比较,BCRP siRNA+阿霉素组MCF-7/ADR细胞增殖能力受到显著抑制(P<0.01).FCM检测显示,与阴性对照组比较,BCRP siRNA组、阿霉素组、BCRP siRNA+阿霉素组早、晚期凋亡细胞数量均显著增加(P<0.01).实时荧光定量PCR和Western blot实验结果显示,与阴性对照组比较,BCRP siRNA组、阿霉素组、BCRP siRNA+阿霉素组PKC、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下调,而p53 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01);与阿霉素组比较,BCRP siRNA+阿霉素组PKC、Bcl-2 mRNA和蛋白表达均下调,而p53 mRNA和蛋白表达上调(P<0.01).结论 沉默BCRP表达通过调控PKC、Bcl-2、p53表达提高乳腺癌MCF-7/ADR细胞对阿霉素的药物敏感性.
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