CM-DiI应用于标记大鼠牙髓干细胞的实验研究

目的 探讨荧光染料CM-DiI用于标记大鼠牙髓干细胞可行性. 方法 酶解组织块法体外分离培养SD大鼠牙髓细胞,有限稀释法对所培养的牙髓细胞进行纯化,获得呈克隆集落式生长的干细胞,免疫组化法鉴定培养细胞种属来源,成脂/成骨诱导液诱导细胞向脂肪、骨细胞方向分化.荧光染料CM-DiI体外标记第3代大鼠牙髓干细胞,观察标记后细胞增殖情况以及细胞乳酸脱氢酶释放率,统计学分析CM-DiI标记与未标记细胞的生物学状态. 结果 利用酶解组织块法可培养出大鼠牙髓细胞,经有限稀释法纯化后可获得克隆集落状生长的大鼠牙髓干细胞;免疫组化法确定大鼠牙髓细胞为间充质来源,且具有向脂肪细胞、骨细胞等多向分化的潜能.CM-DiI标记后的大鼠牙髓干细胞的胞浆、胞膜呈现红色荧光,并且细胞生长为梭形、生长状况良好.与未进行细胞标记组比较,CM-DiI标记后细胞形态、上清液乳酸脱氢酶含量及CCK-8值均无明显变化,两者差异无统计学意义(P＞0. 05). 结论 CM-DiI可用于标记大鼠牙髓干细胞,此种标记方法操作简便、染色速度快,对所标记的细胞无毒性.