重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定

目的 构建表达人神经生长因子β基因片段的重组腺病毒AdCMV-hNGF-β. 方法 以健康人白细胞中DNA为模板,扩增hNGF-β基因片段,导入pGEM-T-Easy质粒,获得重组质粒pGEM-T/hNGF-β.经酶切鉴定后与复制缺陷型腺病毒穿梭质粒pACCMV-pLpA构建重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-hNGF-β.酶切鉴定后再与辅助包装质粒PJM17共转染293细胞,经同源重组后,构建复制缺陷型重组腺病毒AdCMV-hNGF-β.对AdCMV-hNGF-β进行基因鉴定,并测定滴度及在HeLa细胞中的表达. 结果 顺利克隆出hNGF-β基因片段,构建的重组质粒pGEM-T/hNGF-β和重组腺病毒穿梭质粒pACCMV-hNGF-β,经酶切鉴定实际结果与理论推导符合.构建的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV-hNGF-β滴度为1.2×1012pfu/ml,并能在HeLa细胞中表达. 结论 以hNGF-β基因片段为基础成功构建了重组腺病毒AdCMV-hNGF-β,测试表明该重组病毒具有高滴度活性和良好的感染人类细胞、表达目的蛋白的能力.