携带SLC基因的Birc5-siRNA质粒载体的构建及鉴定

目的：构建携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒载体，为肿瘤靶向治疗研究提供基础。方法使用Ambion公司siRNATarget Finder设计的Birc5 mRNA干扰序列，将Birc5‐siRNA插入载体 PEGFP6‐1后转化大肠埃希菌扩增培养，提取质粒；将SLC插入质粒pGenesil‐8后转化细菌扩增培养，提取质粒；挑取酶切鉴定正确的质粒转化菌液测序鉴定；采用分子克隆技术构建特异性沉默Birc5且携带SLC基因的质粒，命名为pgsiRNA‐Birc5＋SLC。结果质粒Birc5能被 EcoRⅠ酶切出1条约400 bp的DNA条带，说明Birc5‐siRNA 已插入质粒载体PEGFP6‐1；pGenesil‐8‐SLC能被BglⅡ＋ XbaⅠ酶切出1条约430 bp的DNA条带，说明SLC插入正确；酶切鉴定正确的质粒转化菌液Birc5‐siRNA和SLC测序结果显示均为插入正确的克隆质粒；经酶切鉴定分析显示pgsiRNA‐Birc5＋SLC符合酶切鉴定结果，表明携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒载体构建成功。结论成功构建了携带SLC基因的Birc5‐siRNA质粒，为进一步研究靶向沉默肿瘤Birc5基因并趋化淋巴细胞抗肿瘤研究提供了工具和基础。