TRAF4沉默对食管癌细胞Eca-109增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)靶向沉默肿瘤坏死因子受体相关因子4(TRAF4)基因表达对人食管癌细胞恶性行为的影响.方法 选取对数生长期Eca-109细胞并行脂质体法高效转染2条靶向沉默TRAF4的siRNA (si-TRAF4-1、siTRAF4-2),采用实时定量PCR检测转染后的TRAF4 mRNA水平以筛选沉默效果较好的siRNA为沉默组,同时设阴性对照组(转染阴性siRNA序列)和空白对照组.采用噻唑蓝(MTT)法检测转染24、48、72、96 h的吸光度值以计算各组增殖抑制率,Annexin Ⅴ-FITC/PI双染、Caspase-3 FITC单染或PI单染流式细胞术检测转染后的凋亡率、Caspase-3活化率和细胞周期分布情况.结果 靶向沉默TRAF4 24～96 h内,转染siTRAF4-1、siTRAF4-2的Eca-109细胞中TRAF4 mRNA水平均低于未转染或转染对照siRNA的细胞,且转染siTRAF4-1、siTRAF4-2后的沉默率均高于转染对照siRNA的细胞(均P＜0.05);后续试验选取沉默率较高的siTRAF4-1进行研究.与空白对照组和阴性对照组相比,沉默组的增殖抑制率、凋亡率及Caspase-3活化率均升高,差异有统计学意义(均P＜0.05);沉默组转染96 h的G0/G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组,而S、G2/M期细胞比例低于其余两组,以上差异均有统计学意义(均P＜0.05);空白对照组和阴性对照组以上指标的差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 通过siRNA靶向沉默TRAF4基因表达的效果较好,可抑制细胞增殖并诱导凋亡、Caspase-3活化和细胞周期G0/G1期阻滞,为食管癌靶向治疗提供了方法学基础.