二甲双胍通过干预上皮-间质转化逆转尼古丁诱导的肺癌吉非替尼耐药

目的:探讨尼古丁(nicotine,NIC)诱导EGFR敏感突变PC-9肺癌细胞株吉非替尼耐药及二甲双胍对其作用.方法:PC-9分成4组:空白组、尼古丁组、二甲双胍组、尼古丁和二甲双胍组,利用定量反转录聚合酶连锁反应(quantificational realtime polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测E-cadherin和Vimentin信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)的表达,Western blot检测E-cadherin和Vimentin蛋白表达,细胞计数试剂盒(cell counting Kit-8,CCK-8)检测不同分组细胞对吉非替尼药物敏感情况.Transwell小室实验检测细胞侵袭迁移.结果:尼古丁诱导PC-9细胞上皮间质转化呈时间浓度依赖,在10μmol/L尼古丁处理72 h后,发生E-cadherin下调和Vimentin上调最明显,故选该条件做以下实验.CCK-8提示,相比空白组,尼古丁组PC-9细胞对吉非替尼敏感性减弱,在吉非替尼浓度为0.05 μmol/L最明显(P=0.000).Matrigel侵袭实验提示尼古丁组穿膜细胞数较空白组明显增多[(15.70±1.53)个/高倍视野vs.(32.70±2.08)个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000];迁移实验的结果与之相似.与空白组相比,尼古丁组E-cadherin mRNA表达水平明显降低[(0.932±0.100) vs.(0.459±0.024),F=25.924,P=0.000,P=0.000)],Vimentin mRNA表达水平明显升高[(1.200±0.200) vs.(1.973±0.129),F=20.998,P=0.000,P=0.000].蛋白水平变化与之相同.尼古丁+二甲双胍组可以增加尼古丁作用PC-9对吉非替尼的敏感性,在吉非替尼浓度为0.05、0.10、0.50、1.00、5.00 μmol/L时有统计学意义.尼古丁+二甲双胍组可以减弱尼古丁组的穿膜数[(17.00±2.00)个/高倍视野vs.(32.70±2.08)个/高倍视野,F=75.406,P=0.000,P=0.000],迁移实验呈现相同的结果.相比于尼古丁组,尼古丁+二甲双胍组上调E-cadherin mRNA[(0.459±0.024) vs.(0.838±0.058),F=25.924,P=0.000,P=-0.000)],下调Vimentin mRNA[(1.973±0.129) vs.(1.467±0.115),F=20.998,P=0.000,P=-0.003)].结论:尼古丁通过上皮间质转化诱导PC-9细胞吉非替尼耐药,二甲双胍可以逆转上述现象.