尿酸酶基因工程菌的构建与分泌表达

Lixia Tang,Jie Liu,Xianjun Liu,Xue Jiang

Journal of Chongqing Medical University（2018）

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Abstract

目的:将产朊假丝酵母菌尿酸酶编码基因克隆至已改造的表达载体pET-28a中,使尿酸酶在大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性.方法:①利用重组PCR技术删除pET-28a中Lac O和Lac I序列构建表达载体;②金黄色葡萄球菌蛋白A(Staphylococal Protein A,SPA)信号肽编码基因与尿酸酶基因N端融合成目的基因;②将目的基因克隆至表达载体中,再转化至E.coli DH5α中,使之表达;④利用SDS-PAGE鉴定并测定表达产物生物学活性.结果:尿酸酶在E.coli中以分泌的形式持续表达,并具有生物学活性.结论:利用肠道内正常菌群E.coli构建可分泌、持续表达蛋白的载体pET-28a-sUOX,可将表达的尿酸酶作用于高尿酸血症模型上,为应用于动物实验通过肠道降低尿酸水平提供依据.

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