葡萄糖调节蛋白GRP78与HBV的PreS1相互作用位点的初步研究

目的:初步研究78 kD的葡萄糖调节蛋白(the 78 kD glucose-regulated protein,GRP78)与乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)的前S1蛋白(PreS1)的相互作用位点.方法:利用PCR技术扩增GRP78的基因,将扩增的目的基因克隆至pW28载体质粒,在大肠杆菌(Escherichia coli,E.coli)B834中表达,经过镍离子亲和层析柱纯化GRP78蛋白;将PreS1 3个截短片段的重组质粒(pGST-PreS1-X1/X2/X3)在B834中表达后,经过GST亲和层析柱纯化相应蛋白;利用蛋白质体外结合实验(pull down)、微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)检测GRP78与PreS1 3个截短片段的相互作用.结果:成功构建重组质粒pW28-GRP78;获得GRP78蛋白及PreS1 3个截短片段的融合蛋白;pull down及MST实验验证了GRP78可以与PreS1的3个片段结合,且GRP78与GST-PreS1-X1结合效果最好.结论:利用分子克隆技术及蛋白质表达纯化技术,获得GRP78蛋白及PreS1截短片段的融合蛋白,并初步筛选了PreS1与GRP78的相互作用位点,为后续研究打基础.