RNA编辑酶ADAR1在Huh7.5.1细胞中抑制HCV复制的研究

目的:探究干扰素在Huh7.5.1细胞中对RNA编辑酶 (adenosine deaminases acting on RNA 1, ADAR1) 表达的影响, 以及ADAR1对丙型肝炎病毒 (hepatitis C virus, HCV) 复制的调控作用.方法:干扰素 (IFN-α, 30 IU/m L) 刺激Huh7.5.1细胞后, 利用real-time PCR和Western blot检测ADAR1表达水平的变化, 同时HCV以一定滴度 (0.2 MOI) 感染Huh7.5.1细胞, 观察IFN-α对HCV复制的影响;利用si RNA降低ADAR1表达, 过表达质粒 (ADAR1 p110和p150) 增加ADAR1表达, 并进一步利用基因编辑技术建立ADAR1稳定敲除细胞株, 明确ADAR1与HCV的复制关系.结果:IFN-α诱导Huh7.5.1细胞ADAR1 p150表达 (48 h:t=10.400, P=0.007;72 h:t=19.390, P=0.002) , 而不影响ADAR1 p110表达 (48 h:t=0.806, P=0.472;72 h:t=1.929, P=0.133) , 同时IFN-α可显著抑制HCV复制 (48 h:t=10.170, P=0.001;72 h:t=35.810, P=0.000) .ADAR1 p110和p150过表达48 h后, HCV病毒核酸和蛋白水平均明显低于空白对照 (P=0.004, P=0.015) ;ADAR1 si RNA干扰后, HCV复制增加了2倍以上, 差异显著 (t=13.530, P=0.000) ;利用Crispr-cas9技术敲除掉Huh7.5.1中的ADAR1后, HCV复制也明显增加 (t=5.259, P=0.023) ;ADAR1干扰后IFN-α仍然存在对HCV明显的抑制作用 (t=9.146, P=0.001) .结论:IFN诱导蛋白ADAR1可以抑制HCV复制, 且ADAR1部分介导了IFN-α对HCV复制的抑制.