姜黄素通过下调VEGF的表达抑制髓母细胞瘤Daoy细胞增殖的作用研究

目的:血管的新生与髓母细胞瘤的生长、侵袭和转移密切相关,本实验旨在观察姜黄素对髓母细胞瘤Daoy细胞的生长及其血管生长因子的影响,并探讨可能的机制.方法:体外培养髓母细胞瘤Daoy细胞,然后经不同浓度(5、10、20、40μmol/L)的姜黄素作用不同时间(24、48、72 h)后,通过MTT法检测姜黄素对Daoy细胞生长增殖的影响;ELISA法检测上清液中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的生成水平,Western blot检测Daoy细胞中Wnt/β-catenin通路中重要分子β-catenin以及VEGF蛋白水平的表达.结果:MTT结果示空白对照组、DMSO组、5 μmol/L组、10 μmol/L组、20 μmol/L组和40 μmol/L组作用24 h后,细胞的抑制率分别为(4.2±0.3)％、(4.3±0.5)％、(6.1±0.3)％、(6.9±0.7)％、(30.5±1.7)％和(40.9±2.4)％,差异具有统计学意义(F浓度=151.997,P=-0.000);当20、40μmol/L的姜黄素作用48 h和72 h后,Daoy细胞的增殖抑制率分别为(41.3±2.0)％、(51.2±2.9)％、(48.4±1.6)％和(60.9±3.2)％,相较于作用24h,差异也具有统计学意义(F时间=281.531,P=0.000;F浓度x时间=269.728,P=0.000).ELISA结果显示:空白对照组、DMSO对照组、5μmol/L组、10 μmol/L组、20 μmol/L组、40μmol/L组细胞上清液中VEGF的含量分别为(237.5±2.5)、(248.4±3.0)、(235.6±7.1)、(230.8±3.8)、(198.2±9.9)、(150.5±3.6) pg/mL,差异具有统计学意义(F浓度=30.921,P=0.000).当20 μmol/L和40 μmol/L的姜黄素作用48 h和72 h后,Daoy细胞上清液中生成的VEGF含量分别为(170.3±2.7)、(124.6±3.1)、(140.1±13.9)和(111.5±11.6) pg/mL,与作用24 h比较,差异也具有统计学意义(F时间=69.234,P=0.000;F浓度x时间=185.173,P=0.000).Western blot结果显示,空白对照组、DMSO组、5μmol/L组、10 μmol/L组、20 μmol/L组和40μmol/L组Daoy细胞内β-catenin蛋白水平表达相对吸光度(absorbance,A)值分别为(0.654±0.021)、(0.873±0.034)、(0.869±0.018)、(0.857±0.024)、(0.472±0.035)和(0.351±0.019)(F浓度×时同=27.813,P=0.000);VEGF蛋白水平的相对A值为(0.781±0.027)、(0.801±0.025)、(0.792±0.034)、(0.750±0.024)、(0.324±0.015)和(0.201±0.012)(F浓度=74.826,P=0.000).结果还显示,当姜黄素浓度为20 μmol/L时,随着药物作用时间的延长,Daoy细胞内β-catenin和VEGF蛋白表达的相对A值明显降低,差异具有统计学意义,呈时间依赖性(F=19.156,P=0.001;F=100.282,P=0.000).结论:姜黄素可通过下调Wnt/β-catenin通路及下游靶基因VEGF的表达进而抑制Daoy细胞增殖,这或将为姜黄素治疗髓母细胞瘤提供新的理论依据.