ZHX3基因沉默对BMSCs中BMP2/smad通路的影响

目的:探讨转录抑制因子——锌指蛋白和同源框3(zinc fingers and homeoboxes 3,ZHX3)基因沉默对骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)中BMP2/smad通路相关因子骨形成蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP2)、磷酸化smad1 (phospho-smad1(或pho-smad1))表达的影响.方法:构建ZHX3低表达慢病毒载体转染大鼠BMSCs,同时设阴性对照空载病毒转染BMSCs及空白对照不做任何处理的BMSCs.采用荧光显微镜下测定细胞转染率、免疫印迹技术鉴定转染效果、免疫细胞化学和免疫印迹技术定性定量检测ZHX3沉默时BMP2、pho-smad1和smad4的表达情况.细胞经成骨诱导液处理后进行碱性磷酸酶和茜素红染色检测各组细胞成骨能力.结果:①复苏培养的细胞具有BMSCs形态.②转染后,ZHX3低表达组和空载体对照组均表达绿色荧光,转染率分别为(93.18±4.41)％和(92.56±4.35)％,空白对照组不表达荧光,未见转染阳性细胞(F=1 123.464,P＜0.05).③免疫细胞化学及免疫印迹结果显示,BMP2、pho-smad1、smad4于3组细胞内均可见阳性表达,但ZHX3低表达组的BMP2、pho-smad1水平(0.383 0±0.006 3,0.329 1±0.025 8)明显高于空白对照组(0.306 2±0.011 6,0.209 0±0.017 0)和空载体对照组(0.291 2±0.022 2,0.180 0±0.018 7),P＜0.05;而ZHX3低表达组smad4的表达(0.107 4±0.004 3)显著低于空白对照组(0.380 1±0.023 6)和空载体对照组(0.353 7±0.016 7),P＜0.05.④空白对照组、空载体对照组、ZHX3低表达组均可见碱性磷酸酶阳性表达的细胞及矿化结节,但后者数量均小于前两者.结论:ZHX3基因低表达可延迟BMSCs体外成骨能力,可能通过调控BMP2/smad通路中的smad4来发挥作用.