金黄色葡萄球菌重组表皮剥脱毒素A的原核表达

目的:通过基因工程技术获取重组表皮剥脱毒素A (recombine exfoliative toxin A,rETA),为深入研究表皮剥脱毒素的致病机制提供实验材料.方法:根据GenBank公布的ETA基因序列设计引物,从金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)基因组中扩增ETA基因,插入原核表达载体pQE30,构建重组质粒pQE30-ETA.将pQE30-ETA转化表达菌E.coli M15,优化诱导表达条件,SDS-PAGE分析重组蛋白的表达,Western blot鉴定.重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,注入BALB/C小鼠皮下,观察皮肤病理改变,鉴定重组蛋白的生物学活性.结果:重组质粒pQE30-ETA序列分析显示插入的基因片段全长927 bp,与基因文库中的ETA序列完全吻合.SDS-PAGE分析显示表达产物相对分子量约为27 kD,在IPTG终浓度0.1 mmol/L,诱导时间4h,可得到最大表达量的可溶性蛋白,约为20％.Western blot显示与S.aure us产生的ETA蛋白在同一位置,重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后蛋白纯度达90％以上,注射重组蛋白的小鼠表皮内出现水疱和裂隙.结论:成功构建了重组质粒pQE30-ETA,表达了具有生物学活性的重组S.aureus表皮剥脱毒素A.