人ZnT-8作为1型糖尿病新型免疫调节剂的研究

目的:构建人锌转运体8(Zinctransporter 8,ZnT-8)羧基端原核表达载体,表达和纯化人ZnT-8羧基端(ZnT-8-COOH)重组蛋白,为寻找1型糖尿病新型免疫调节剂创造条件.方法:人ZnT-8-COOH cDNA克隆入pET-32a载体,在大肠杆菌BL21中利用异丙基-硫代-β-D-半乳糖苷(isopropyl-thio-β-D-galactoside,IPTG)诱导表达,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定表达产物,镍离子亲和层析纯化重组蛋白.40只4周龄的雌性非肥胖型糖尿病(non obese diabetic,NOD)小鼠随机分为ZnT-8重组蛋白预处理组及生理盐水对照组,分别腹腔注射ZnT-8重组蛋白和生理盐水,每周测量各组NOD小鼠体质量,检测血糖、血清C肽水平.结果:经PCR扩增后得到306 bp的DNA片段,成功构建到pET-32a表达载体上,经测序分析序列正确;ZnT-8重组蛋白在大肠杆BL21中获得成功表达,并得以有效纯化.ZnT-8重组蛋白预处理组NOD小鼠与生理盐水对照组相比,28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的体质量高于生理盐水对照组(P＜0.05).28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血糖低于生理盐水对照组(P＜0.05);28周龄时ZnT-8重组蛋白预处理组的血清C肽水平高于生理盐水对照组(P＜0.05).结论:成功制备人ZnT-8-COOH重组蛋白,并初步证实了其对1型糖尿病的免疫调节作用.