海马神经元无镁致痫性损伤对CREB磷酸化水平的影响

目的:观察原代培养的海马神经元经无镁人工脑脊液诱发癫痫样放电后,cAMP反应元件结合蛋白(cAMP responseelement binding protein,CREB)磷酸化表达水平的变化.方法:将所培养的神经元随机分成癫痫组和对照组,癫痫组中的神经元培养至第10天时,经无镁人工脑脊液(artificial cerebrospinal fluid,ACSF)处理3h建立癫痫样放电模型,对照组中的神经元培养至第10天时,使用正常人工脑脊液处理3h.使用Western blot检测p-CREB和β-actin的表达,免疫荧光双重标记磷酸化CREB(p-CREB)和神经元核抗原(neuronal nuclei,NeuN)的表达.结果:Western blot显示p-CREB水平在癫痫样放电后2h即较对照组增强且在6h达到高峰,在12h和24 h都维持在增强水平,差异皆有统计学意义(P＜0.01).取癫痫样放电后6h的神经元行免疫荧光检测,其荧光强度绝对值较对照组明显增强,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:p-CREB水平在海马神经元无镁致痫性损伤后增强,可能在癫痫样放电中起到重要作用.