重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法的研究

目的确定重组血红素加氧酶-2在大肠杆菌中表达与纯化方法.方法将已构建的血红素加氧酶-2(HO-2)的重组质粒pMW172a/HO-2转入大肠杆菌BL-21,分析不同温度及摇床转速对HO-2表达的影响,确定可溶性表达最佳条件.使用超声波、超速离心、分级盐析、分子筛层析等方法纯化HO-2.检测酶活性.结果确定了HO-2可溶性表达最佳条件为37℃,(85±5)r/min;确定了HO-2具体纯化路线.得到蛋白纯度为95.0%,纯化倍数为2.9倍,收得率为40.9%的活性HO-2蛋白.结论获得了纯度高、具有活性的HO-2蛋白,为进一步进行HO-2结构与功能之间关系的研究提供了可行的纯化路线.