SHIP2对喉癌Hep-2细胞生物学行为的影响及对放疗增敏的机制

目的:探究抑制SHIP2对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和侵袭、迁移的影响;探究X射线处理喉癌Hep-2细胞后细胞增殖、凋亡和周期的变化及SHIP2的表达情况;探究靶向抑制SHIP2基因联合放射治疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡和周期的影响及对放疗增敏的可能机制.方法:①应用小分子干扰RNA技术抑制喉癌Hep-2细胞SHIP2的表达,实验分为5组:空白对照组(Control)、阴性对照组(Negative)、干扰组1(siRNA1)、干扰组2(siRNA2)、干扰组3(siRNA3)],RT-qPCR、Western Blot检测转染24 h后干扰效果;②取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,分别给予0,4Gy X射线(SSD=100 cm)处理,CCK-8检测细胞增殖活力,AnnexinPI-FITC/PI双染检测细胞凋亡,PI单染检测细胞周期,RT-qPCR、Western Blot检测SHIP2 mRNA和蛋白的相对表达量;③取对数生长期的喉癌Hep-2细胞,实验分4组(空白对照组Control、单纯放射组4 Gy、干扰组siRNA-SHIP2、联合处理组siRNA-SHIP2+4 Gy).Western Blot检测SHIP2、pSHIP2、pAKT、caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量.结果:①转染24 h后干扰组2 siRNA2下调作用最显著,较空白对照组SHIP2 mRNA下调达60.1％ (P＜0.05)、SHIP2蛋白下调达57.8％(P＜0.05);与空白对照组对比,siRNA2抑制SHIP2表达后喉癌Hep-2细胞增殖活力、侵袭和迁移能力降低,凋亡增加(P＜0.05).②与0 Gy组比较,放射组各组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P＜0.05);4Gy射线处理后SHIP2 mRNA、SHIP2和pSHIP2蛋白的相对表达量较空白对照组降低(P＜0.05).③与空白对照组、siRNA-SHIP2组和4Gy组比较,联合处理组细胞增殖活力降低,凋亡和G2期阻滞增加(P＜0.05),SHIP2和pSHIP2、pAKT的相对表达量降低(P＜0.05),caspase-3、P21和P27蛋白的相对表达量升高(P＜0.05).结论:靶向抑制SHIP2可与放射治疗协同抑制喉鳞癌Hep-2细胞的增殖活力,促进细胞凋亡和细胞周期G2期阻滞,从而发挥放射增敏的作用.其可能机制是靶向抑制SHIP2表达通过下调PI3K/Akt信号通路活性,进而解除对下游促凋亡因子caspase3和周期阻滞因子P21和P27的抑制作用,与放射线协同增强对喉癌Hep-2细胞的杀伤作用,从而发挥放疗增敏作用.