人巨细胞病毒增殖性感染UL111A基因转录本特征及变化

目的:探究人巨细胞病毒(HCMV)UL111A基因在增殖性感染不同时间点的转录本特征及变化.方法:在HCMV AD169株感染人包皮成纤维细胞(HFF)12 h,24 h,48 h,3 d,5 d,7 d,9 d等不同时间点,抽提RNA,反转录成cDNA,PCR检测UL111A转录本特征.扩增产物通过克隆、测序验证不同时间点UL111A转录本的特征变化.利用真核表达载体pcDNA3.1构建UL111A 3种转录本编码区序列载体pcDNA3.1-cmvIL-10,pcDNA3.1-LAcmvIL-10以及pcDNA3.1-unspliced,Western blot验证构建的载体在293T细胞中的有效表达.结果:感染HCMV AD169株的HFF可以检测到cmvIL-10,LAcmvIL-10以及未剪切3种形式转录本.未剪切形式转录本占比最多,cmvIL-10转录本占比最少.在感染的24 h和9 d 3种转录本都有检测到,而在其他时间点未能检测到cmvIL-10转录本.此外,3种转录本的编码区序列在293T细胞中均可有效表达.结论:HCMV UL111A基因在增殖性感染不同时间点存在3种形式的转录本.