金丝桃素介导的光动力学疗法对K562细胞活性与自噬的影响

目的:观察金丝桃素介导的光动力学疗法(Hyp-PDT)对慢性髓性白血病细胞(K562细胞株)活性与自噬的影响.方法:体外培养K562细胞株经过含金丝桃素(0.4μg/mL)的培养液避光孵育后,采用0.3 mW/cm2光强度及照射4 min实施Hyp-PDT,CCK-8法测定细胞活性.收集照射前,照射后4、8、16 h的细胞悬液,分别在光镜和电镜下观察细胞形态学及自噬体数量,Western blot检测自噬相关蛋白LC3、Beclin-1、p-Akt、Akt的表达水平.结果:金丝桃素组光照后细胞活性随时间延长逐渐降低,与光照前比较,差异均有统计学意义(P<0.01),且与正常细胞组、DMSO细胞组比,所有时间点的细胞活性均显著降低(均P<0.01).Hyp-PDT干预后,金丝桃素组光照后部分细胞出现细胞肿胀变性甚至溶解破裂.透射电镜显示K562细胞照射前即存在自噬体,照射后8 h DMSO组中的自噬体数量开始增多,但金丝桃素组的自噬体数量明显减少.Western blot结果显示:照射后8 h和16 h时金丝桃素组LC3蛋白表达量减少,而DMSO组LC3蛋白含量呈上升趋势;照射后16 h,与DMSO组比,金丝桃素组的Beclin-1蛋白含量明显下降,p-Akt蛋白表达量明显减少(均P<0.01).结论:Hyp-PDT可能通过抑制p-Akt磷酸化,影响PI3K-Akt通路,减少K562自噬,促进细胞死亡,起到杀伤白血病肿瘤细胞的作用.