RanBPM对肾小管钠-氯共同转运子的调控作用及对ERK1/2信号通路的影响

目的:观察Ran结合蛋白M(RanBPM)对肾小管钠-氯共同转运子(NCC)蛋白表达及相关ERK1/2信号通路蛋白表达的影响.方法:免疫共沉淀检测RanBPM蛋白与WNK4蛋白是否存在直接相互作用;观察转染RanBPM质粒对EGF诱导细胞ERK1/2磷酸化的影响,通过转染质粒过表达RanBPM蛋白或siRNA抑制RanBPM基因,免疫蛋白印迹法检测细胞内源性NCC蛋白含量和ERK1/2磷酸化水平的变化.结果:免疫共沉淀实验证实WNK4和RanBPM之间存在直接的相互作用.RanBPM可以抑制EGF诱导的ERK1/2磷酸化.RanBPM过表达可使细胞ERK1/2磷酸化减少(1.000±0.074 vs.0.275±0.041,P<0.01),而NCC蛋白表达增加(1.000±0.115 vs.1.470±0.105,P<0.01).siRNA沉默RanBPM基因后,ERK1/2磷酸化增加(1.000±0.194 vs.2.301±0.220,P<0.01),NCC蛋白表达下降(1.000±0.223 vs.0.556±0.132,P<0.01).转染RanBPM可阻止WNK4对ERK1/2信号通路的影响和对NCC蛋白表达的抑制作用.结论:RanBPM通过与WNK4相互作用,影响ERK1/2信号通路对NCC蛋白表达的调控作用.