丙型肝炎病毒CTL-Th表位嵌合DNA疫苗的构建

目的：构建丙型肝炎病毒（HCV）CTL-Th表位嵌合DNA疫苗并探讨其体内免疫学效应。方法：基于我们前期从HCV中鉴定的4条HLA-A*0201限制性CTL（细胞毒性T细胞）表位（NS4b78-86、NS5a367-375、C181-189和NS2172-180），2条HLA-A*1101限制性CTL表位（NS3609-617和NS5b251-259），1条HLA-A*2402限制性CTL表位（NS5b382-390）和2条Th（辅助性T细胞）表位（P73-15和NS5A276-288），合成编码串联CTL表位和Th表位的基因并克隆入真核表达质粒pcDNATM3.1/myc-His（-）A；阳性重组质粒分别免疫HLA-A*0201、HLA-A*1101和HLA-A*2402转基因小鼠，采用ELISPOT实验和CTL杀伤实验检测小鼠脾细胞内单个CTL表位特异性T细胞的水平及其杀伤靶细胞的效应。结果：合成了含有Kozak序列和编码Igκ信号链序列、7条CTL表位、2条Th表位的基因序列并顺利克隆入了真核表达质粒。阳性重组质粒免疫三种转基因小鼠后，采用ELISPOT实验检测到小鼠脾细胞内存在单个CTL表位特异性分泌IFN-γ的CTL，后者可杀伤负载单个CTL表位的脾细胞。结论：成功构建了可诱导CTL反应的HCV的CTL-Th表位嵌合DNA疫苗。