改良NADPH-d和AchE酶组织化学法诊断先天性巨结肠

目的:探讨进一步改良后的还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶(NADPH-d)和乙酰胆碱酯酶(AchE)酶组织化学染色法诊断先天性巨结肠(HD)的优势,以期提高HD术前及术中诊断的准确率.方法:取HD患儿术中切除的结肠标本18例,其中女7例,男11例,平均年龄(8.6士3)月.标本分狭窄段、移行段、扩张段,其冰冻切片分别用改良的NADPH-d和AchE酶组织化学染色法进行染色,与常规HE染色进行比较,并用肠神经元特异标记物β-TⅢ Tubulin (TUJ-1)行免疫荧光及蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)行免疫组化检查论证改良方法的特异性.结果:NADPH-d法能快速确定扩张段近端切缘是否存在神经节细胞,诊断HD的阳性率为94.4％ (17/18);AchE法对于HD狭窄段黏膜下异常增生的神经丛诊断阳性率为88.9％(16/18);两组间诊断阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).耗时方面NADPH-d法为(7.0±1.7)min,AchE法为(30.9±2.2) min,组间比较差异有统计学意义(P＜ 0.001).上述两种改良方法与TUJ-1及PGP9.5对照结果一致.结论:NADPH-d法能快速确定肠管切缘是否有神经节细胞分布,适用于术中快速诊断HD;AchE法适用于术前直肠黏膜层的活检诊断.