稳定沉默黏着斑激酶结肠癌细胞株SW620的构建

目的:构建稳定沉默黏着斑激酶(FAK)结肠癌细胞株SW620.方法:用构建好的FAK RNA干扰(RNAi)慢病毒载体pLL3.7 FAK及插入无沉默功能序列的阴性对照慢病毒载体pLL3.7,在293FT细胞中包装成慢病毒,感染体外培养结肠癌SW620细胞,作为实验组和阴性对照组,未感染病毒的SW620细胞作为未处理组,通过荧光倒置显微镜检测SW620细胞的感染效率,运用RT-PCR、Western blot方法测定FAK的表达情况,建立稳定转染细胞株.结果:成功包装了靶向FAK的RNAi慢病毒,感染效率＞90％,稳定转染细胞株构建成功.RT-PCR及Western blot方法检测发现实验组与阴性对照组及未处理组相比,FAK的表达明显降低.结论:稳定沉默FAK的RNAi SW620细胞构建成功.