降钙素基因相关肽抑制铜绿假单胞菌外膜囊泡致炎作用

目的 探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对铜绿假单胞菌外膜囊泡(OMVs)诱导炎症反应的影响.方法 培养铜绿假单胞菌并提取OMVs,取1、5、10μg?mL-1 OMVs刺激鼠巨噬细胞RAW264.7,采用ELISA法检测细胞中促炎性细胞因子[包括白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]含量,采用CCK-8法及流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;采用10μg?mL-1 OMVs与1、5、10 nmol?L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,并检测细胞中促炎细胞因子水平;采用20μg?mL-1 OMVs与10 nmol?L-1 CGRP同时处理RAW264.7细胞,检测细胞增殖与凋亡;培养人中性粒细胞,采用脱颗粒实验检测CGRP对其分泌中性粒细胞明胶酶脂质运载蛋白(NGAL)及弹性蛋白酶活性的影响.结果 不同浓度OMVs均能显著刺激RAW264.7细胞分泌TNF-α、IL-6和IL-1β(P<0.05),而CGRP则能够抑制RAW264.7细胞分泌促炎细胞因子,且呈剂量依赖性(P<0.05);20μg?mL-1 OMVs则能够显著降低细胞活性,并促进细胞凋亡(P<0.05),10 nmol?L-1 CGRP与OMVs共同处理能显著增加RAW264.7细胞活性,抑制凋亡发生(P<0.05);不同浓度OMVs均能提升NGAL表达水平以及弹性蛋白酶活性(P<0.05),而10 nmol?L-1 CGRP则能够显著抑制OMVs引起的脱颗粒效应(P<0.05).结论 CGRP可有效下调铜绿假单胞菌OMVs诱导的鼠巨噬细胞RAW264.7促炎因子分泌水平、减少凋亡率以及特异性中性粒细胞释放,进而抑制炎症反应.