表达抗G250人源性抗体腺病毒对肾癌细胞的影响

目的 检测腺病毒Ad-G250表达的G250全长人源性抗体的生物学活性及其对肾癌细胞的影响.方法 扩增纯化腺病毒Ad-G250、Ad-EGFP(对照病毒).病毒感染LO-2细胞,ELISA法检测细胞培养液中抗体的表达量.收集病毒感染后的细胞上清液进行纯化,Western blotting检测纯化抗体的相对分子质量及其与细胞表面G250抗原的结合能力.免疫组化法检测Ad-G250表达的抗体是否具有生物学活性.CCK-8法检测Ad-G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞增殖的影响.Annexin V-PE/7-AAD法检测Ad-G250对肾癌Ketr-3及ACHN细胞凋亡的影响.结果 病毒Ad-G250感染LO-2细胞后G250抗体的表达量随着感染天数的增加而增加.Western blotting实验显示Ad-G250能够表达G250抗体的轻链和重链,电泳图上该抗体能使G250抗原阳性的Ketr-3和786-O细胞在相对分子质量58×103附近出现反应条带,而G250抗原阴性的ACHN和HK-2细胞在相应位置无反应条带.细胞免疫组化实验显示Ketr-3细胞膜被染成棕黄色,而ACHN细胞未见着色.CCK-8实验结果显示,Ad-G250对Ketr-3细胞有抑制作用,而对ACHN细胞的抑制作用不明显;Ad-G250抑制Ketr-3细胞增殖存在浓度及时间依赖性.凋亡实验显示,Ad-G250诱导Ketr-3细胞凋亡作用和ACHN细胞相比差异具有统计学意义,Ad-G250诱导Kert-3凋亡作用和Ad-EGFP相比差异有统计学意义.结论 腺病毒Ad-G250成功表达出具有生物学活性的人源性G250抗体,且Ad-G250可抑制表达G250抗原的肾癌细胞增殖,诱导其凋亡.