细胞角蛋白18的基因克隆及其对Hep G2肝癌细胞增殖迁移的影响

目的 克隆人细胞角蛋白18基因(C K18)编码区并构建重组真核表达载体pEBFP-CK18,研究其对Hep G2肝癌细胞增殖和迁移的影响.方法 以Hep G2细胞mRNA为模板,用RT-PCR扩增CK18基因蛋白编码区,并插入真核表达载体pEBFP-C1中,构建重组质粒pEBFP-CK18.重组质粒用脂质体法稳定转染Hep G2细胞,并用G418筛选出稳定表达外源蛋白CK18的单克隆稳转肝癌细胞株,蛋白免疫印迹检测胞内蛋白表达情况.实时无标记细胞分析和细胞划痕-愈合实验分别评估稳转细胞的增殖和迁移能力.结果 成功获得CK18基因蛋白编码区并构建重组真核表达载体pEBFP-CK18.获得单克隆稳转肝癌细胞株并高表达外源融合蛋白BFP-CK18.发现CK18高表达不影响Hep G2细胞生长,但能够促进细胞迁移.结论 研究表明CK18对肝癌细胞Hep G2的迁移具有促进作用.