MicroRNA-7基因敲减小鼠模型的鉴定

目的 鉴定miR-7基因敲减小鼠模型,为进一步研究miR-7的生物学功能奠定基础.方法 常规剪取7只miR-7基因敲减(miR-7 knock down,miR-7KD)小鼠的脚趾和尾巴,分别用来提取基因组DNA和总RNA;剪取1只WT(wild-type,Wr)小鼠的尾巴,提取其总RNA;将提取的两组小鼠的总RNA逆转录成eDNA;分别以基因组DNA和eDNA为模板,用特异性引物PCR技术扩增目的基因增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)片段;提取WT和miR-7KD小鼠7个不同组织器官的总RNA,利用Real-time PCR探针法检测各组织器官中miR-7成熟体的表达水平;HE染色观察miR-7KD小鼠心脏、肺脏以及结肠的形态学结构改变.结果 PCR结果显示,模型小鼠的脚趾基因组DNA和尾巴cDNA中均能扩增出载体目的基因EGFP片段;Real-time PCR结果显示,miR-7KD小鼠心脏、肝脏和脾脏等组织器官miR-7成熟体的表达水平较WT小鼠均显著下调(P ＜0.05);HE染色结果显示,miR-7 KD小鼠心脏、肺脏以及结肠形态学结构发生了明显的病理性改变.结论 成功鉴定了miR-7基因敲减小鼠模型,为后续深入探讨该分子的生物学功能提供重要实验基础.