可诱导表达hFGFR1α稳定细胞系的建立与表达优化

目的:构建hFGFR1α(human fibroblast growth factor receptor 1 alpha,hFGFRα)稳定细胞系,优化获得最适诱导表达条件,实现可诱导的、高效的稳定表达.方法:将hFGFR1α基因编码区全长克隆入pcDNA5/FRT/TO/2×Flag表达载体,连同pOG44重组酶质粒共转染人宿主细胞Flp-InTM-T-RexTM-293细胞系(HEK293H),潮霉素B筛选获得阳性克隆细胞系HEK293H/hFGFR1α.用不同浓度强力霉素(doxycline,Dox)或者不同作用时间对HEK293H/hFGFR1α细胞系进行诱导表达,Western Blot鉴定hFGFR1α蛋白的表达情况.结果:构建了pcDNA5-FRT/TO/2×Flag/hFGFR1α重组表达载体,获得了可被Dox诱导表达的HEK293H/hFGFR1α稳定细胞系;0.001μg/mL Dox即可诱导hFGFR1α蛋白表达,0.01 μg/mL Dox即可诱导表达量达峰值;Dox对该细胞系作用2h即诱导hFGFR1α蛋白表达,对其作用24 h后该细胞系的表达明显增强.结论:成功构建了可诱导的、高效的稳定表达细胞系HEK293H/hFGFR1α;Dox诱导该细胞系表达具有剂量差异性和时间依赖性.