双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶抗体

目的:建立检测烟曲霉硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase GliT,TR)特异性抗体的双抗原夹心ELISA法,同时对其临床应用进行评价.方法:利用基因工程技术制备重组TR作为包被抗原和酶标记抗原,采用棋盘滴定法优化双抗原夹心ELISA法的反应条件,并考察ELISA法的敏感性、特异性以及重复性.用双抗原夹心ELISA法测定273例住院患者(侵袭性曲霉病50例、侵袭性念珠菌病46例、念珠菌定植82例、细菌感染95例)以及200例健康人血清,并与实验室前期建立的间接ELI-SA法检测TR抗体的结果进行比较.结果:双抗原夹心ELISA法工作条件为TR抗原包被浓度为1.0 μg/mL,酶标抗原1∶500稀释;封闭液含50g/L脱脂奶粉溶液的PBS-T,待测血清稀释度为1∶100.患者血清检测结果显示,高、中、低3份血清批内变异系数(CV)分别为11.2％、11.8％和12.3％;不同批次重复测定6次,其批间CV分别为10.9％、12.1％和13.5％.重组抗原对血清中相应抗体的阻断率为94.4％.通过ROC曲线确定吸光度的cut-off值为0.126.检测侵袭性曲霉病的敏感性和特异性分别为80.0％ (40/50)和95.5％ (404/423),敏感性高于检测TR抗体的间接ELISA法(83.3％vs.72.2％).结论:建立了双抗原夹心ELISA法检测烟曲霉TR特异性抗体,可提高侵袭性曲霉病的诊断率,具有临床应用价值.