人胰腺星状细胞分离方法改良

目的:探讨人胰腺星状细胞的两种新分离方法.方法:通过酶消化-密度梯度离心法进行静止态的人正常胰腺星状细胞的分离,分离获得的细胞在含10％FBS的DMEM/F12继续培养.通过组织块外植法获得激活态的人肿瘤相关胰腺星状细胞(CaPSCs),分离获得的细胞在含20％FBS的DMEM/F 12继续培养.结果:通过方法改良,1 g人正常胰腺组织能够获得(0.5～5.0)×106个星状细胞,细胞活率约为90％.使用新的组织块外植法后,组织块不易掉落,细胞爬出时间显著缩短,约5～10 d即可获得CaPSCs.所有细胞贴壁良好,细胞倍增时间约为24h.正常胰腺星状细胞(normal pancreatic stellate cells,NPSCs)培养早期形态符合典型静止态星状细胞特征,细胞为多边形或圆形,内含丰富脂滴,在荧光显微镜下可观察到320nm激发波长下的蓝绿色自发荧光.NPSCs培养晚期和CaPSCs呈多触角状,胞内无脂滴,细胞增殖速度明显快于静止态细胞.激活态的细胞均表达α-SMA、Desmin、vimentin、GFAP等胰腺星状细胞特征性标记.结论:新的原代培养方法能够满足静止态和激活态两种状态胰腺星状细胞的分离培养,同时能够增加细胞得率、缩短分离培养时间,所获得细胞的活性和纯度符合进一步实验的要求,为胰腺星状细胞的相关研究提供了便利.