间充质干细胞旁分泌物质诱导肝星状细胞凋亡的体外研究

目的:研究间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)旁分泌物质对活化的肝星状细胞Lx-2的影响及作用机制.方法:应用6孔塑料细胞培养板,每孔使用半透膜,构建Transwell共培养体系;将骨髓来源的间充质干细胞(bone marrowmesenchymal stem cell,BM-MSC)和人肝星状细胞系Lx-2分别接种在体系的上下层,并把此组作为实验组,单独培养的Lx-2作为对照组,观察培养液中MSC旁分泌物质对Lx-2的影响.采用流式细胞术及Hoechst33342染色法分别检测Lx-2细胞凋亡的情况,qRT-PCR和Western blot检测Lx-2中解耦联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)的mRNA和蛋白水平的表达量,荧光探针法检测Lx-2细胞内及线粒体中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的荧光强度,采用硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid,TBA)法检测细胞丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量.结果:与对照组相比,Hoechst 33342染色后可见部分Lx-2染色质固缩、颗粒状荧光等凋亡细胞典型表现,实验组Lx-2凋亡率是对照组的2.6倍(P＜0.05).实验组Lx-2中UCP2 mRNA及蛋白表达量显著低于对照组(P＜0.05);实验组Lx-2细胞内和线粒体中ROS水平明显升高.细胞培养上清中MDA为(0.43±0.47)mmol/L,显著高于对照组(0.16±0.43)mmol/L(P＜ 0.05).结论:MSC旁分泌物质有诱导Lx-2细胞凋亡的作用;可能与MSC旁分泌物质抑制UCP2的表达,促进细胞内及线粒体ROS过量生成有关.