小儿急性淋巴细胞性白血病微小残留病免疫治疗的初步研究

目的:研究利用体外培养的激活脐血造血干细胞(activat ed cord blood stem cell, ACBSC),对急性淋巴细胞性白血病(ALL)患儿微小残留病(MRD) 进行免疫治疗的疗效.方法:无菌枸橼酸(ACD)抗凝脐血收集,经Percoll单个核细胞分离与植物血凝素(PHA)培养,采用桥联免疫组化(APAAP)方法进行PHA激活前后CD3、CD4、CD8抗原测定 ;应用双抗体夹心ELISA法进行肿瘤坏死因子(TNF-α)检测;利用PCR方法对克隆性重排的T 细胞受体(TCR)基因进行测定,检查外周血中ALL MRD.结果:①脐血单个核细胞以一定浓度PHA(20 mg/L)培养激活后,其中表达C D3、CD4、CD8抗原的淋巴细胞数增高.②未经PHA激活的单个核细胞TNF-α分泌呈一过性, 72 h后检测＜10 pg/ml;经PHA激活48 h后,分泌维持在一个较高水平,达600 pg/ml.③6 例ALL患儿输注前骨髓和外周血中MRD测定全部阳性,4例经多次输注,半年后MRD检测为阴性,骨髓中MRD明显减少,其余2例骨髓和外周血中MRD检测均为阴性.结论:ACBSC能够分泌抗肿瘤细胞因子及可能具有细胞毒T淋巴细胞(CTL)样作用 ;可望通过利用脐血免疫治疗方法,对小儿ALL的MRD进行彻底清除;利用ACBSC移植 ,可能是治疗小儿ALL MRD安全有效的免疫治疗方法.