多房棘球蚴重组蛋白 CTB_Emy162的原核表达及分离纯化#

目的：构建融合基因 CTB_Emy162原核表达系统，纯化得到多房棘球蚴重组蛋白CTB_Emy162。方法根据多房棘球蚴抗原 Emy162在 GenBank 中的序列，用生物信息学软件OptimumTM Codon 优化密码子适应指数（CAI）、最优密码子频率（FOP）及 GC 含量从而获得适合大肠杆菌 BL_21表达的 Emy162基因序列。PCR 扩增 Emy162基因，定向在 pET_28a_CTB 的 CTB 基因5′端插入 Emy162基因。构建 CTB 和 Emy162双基因原核表达质粒 pET28a_CTB_Emy162，将该质粒转化于 E.coli BL_21（DE3）中，经 IPTG 诱导蛋白表达后，利用 Ni_NTA 柱亲和层析及离子交换色谱纯化后获得目的蛋白。结果 OptimumTM Codon 获得优化后的 Emy162序列，经生物公司测序及酶切鉴定结果证明重组质粒 pET28a _ CTB _ Emy162构建成功，进一步实验结果表明CTB_Emy162在原核表达系统 pET_28a 中主要以包涵体形式存在，在可溶部位少量表达。继而经Ni_NTA柱亲和纯化及离子交换色谱纯化获得 CTB _ Emy162纯蛋白。结论以大肠杆菌E.coli BL_21（DE3）及 pET _28a 构成的原核表达系统能够成功表达重组蛋白 CTB _ Emy162， Ni_NTA纯化柱能够纯化目的蛋白 CTB_Emy162。